
一、儀器定義與用途
托普云農(nóng)轉(zhuǎn)基因品種快速檢測儀(典型型號(hào)TPJY-1)系國產(chǎn)現(xiàn)場級(jí)分子檢測裝備,以實(shí)時(shí)熒光定量PCR為核心檢測手段,配合植物基因組DNA快速提取試劑與專用轉(zhuǎn)基因篩查/轉(zhuǎn)化體鑒定試劑盒,用于在非實(shí)驗(yàn)室場所(田間、糧庫、種子企業(yè)、基層檢測站)對(duì)玉米、大豆、水稻、棉花等農(nóng)作物及其加工品中的外源轉(zhuǎn)基因元件進(jìn)行定性篩查及特定轉(zhuǎn)化體的精準(zhǔn)鑒定,亦可作為常規(guī)實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增儀使用。
二、檢測原理
核酸提取:采用裂解—吸附—洗脫一步式快速提取法,常溫下破碎植物組織(葉片或種子粉末)并選擇性吸附基因組DNA,去除蛋白與多糖干擾,直接獲取可用于擴(kuò)增的模板。
實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增與檢測:以TaqMan探針?biāo)庠磉M(jìn)行雙重或多重靶標(biāo)同步擴(kuò)增——每一反應(yīng)管同時(shí)設(shè)置內(nèi)參基因(內(nèi)源參照,如玉米zSSIIb、大豆Lectin)與外源轉(zhuǎn)基因靶標(biāo)(如35S、NOS、特定轉(zhuǎn)化體基因)。PCR過程中熒光基團(tuán)被探針?biāo)舛尫判盘?hào),儀器實(shí)時(shí)采集各通道熒光強(qiáng)度,依據(jù)Ct值判定陰陽性:內(nèi)參基因擴(kuò)增正常表明提取與擴(kuò)增體系有效,外源靶標(biāo)出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線且Ct值小于預(yù)設(shè) cutoff 值為陽性,無擴(kuò)增或超出cutoff為陰性。
免疫層析快速篩查(配套試紙):對(duì)于現(xiàn)場初篩需求,可配合雙抗體夾心膠體金免疫層析試紙條檢測特定轉(zhuǎn)基因表達(dá)蛋白,數(shù)分鐘內(nèi)完成定性初篩,與分子檢測互為補(bǔ)充。
三、硬件結(jié)構(gòu)與組成
熱循環(huán)模塊:半導(dǎo)體帕爾貼(Peltier)加熱/制冷架構(gòu),PID算法溫控,多阱獨(dú)立均溫設(shè)計(jì),支持高速升降溫循環(huán)與熱蓋防冷凝功能。
光學(xué)檢測系統(tǒng):雙通道(或以上)固定式濾光片分光光路,LED激發(fā)光源配合光電二極管/CMOS探測器陣列,各孔同步熒光采集,無機(jī)械掃描部件。
人機(jī)交互:彩色觸控屏嵌入式操作系統(tǒng),引導(dǎo)式建板、程序編輯、實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線顯示及自動(dòng)陰陽判定。
數(shù)據(jù)管理:內(nèi)置存儲(chǔ)器保存實(shí)驗(yàn)文件,支持USB導(dǎo)出、WiFi/4G無線傳輸及檢測報(bào)告(含陰陽判定、Ct值、擴(kuò)增圖)直接打印或電子歸檔。
供電與便攜性:交直流兩用,整機(jī)緊湊輕量,適配現(xiàn)場便攜箱攜行。
配套組件:植物基因組DNA快速提取試劑、專用轉(zhuǎn)基因多重篩查及轉(zhuǎn)化體鑒定試劑盒、一次性研磨棒/迷你研磨器、八連管/單管等。
四、可檢項(xiàng)目(典型范圍)
篩查靶標(biāo):CaMV 35S啟動(dòng)子、NOS終止子、pat/bar基因、nptII等通用轉(zhuǎn)基因元件。
轉(zhuǎn)化體鑒定:常見商業(yè)化轉(zhuǎn)化體特異序列(國產(chǎn)及進(jìn)口玉米、大豆轉(zhuǎn)化體依試劑盒版本覆蓋)。
內(nèi)參基因:玉米zSSIIb、大豆Lectin、水稻SPS等物種特異性內(nèi)源參照基因。
免疫層析配套檢測:Bt Cry1Ab/1Ac、Bt Cry2A、CP4-EPSPS等轉(zhuǎn)基因表達(dá)蛋白定性初篩。
五、主要功能特點(diǎn)
1、 小巧輕便易攜帶:裝備輕巧易攜帶,把實(shí)驗(yàn)室裝進(jìn)背包里,搬進(jìn)農(nóng)田。背上它,你可以在非標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室場景,隨時(shí)隨地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化檢測。既確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性和準(zhǔn)確性,又提高了工作效率。
2、快速檢測、精準(zhǔn)鑒定:相較于傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室基因檢測,新型轉(zhuǎn)基因快速檢測儀通常只需要在30分鐘以內(nèi),便可完成基因鑒定,并可對(duì)具體哪一種基因品種進(jìn)行精準(zhǔn)鑒定。大大縮短了檢測過程的時(shí)間。
3、 數(shù)據(jù)真實(shí)可靠:該檢測儀數(shù)據(jù)精準(zhǔn)度與標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室檢測(伯樂PCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù))基本保持一致,確保了數(shù)據(jù)的一致性和可靠性。在保證經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)PCR方法結(jié)果準(zhǔn)確可靠的基礎(chǔ)上,實(shí)現(xiàn)技術(shù)升級(jí),使其更集成,便捷,效率更高,成本更低。
4、 操作簡單易上手:告別繁瑣的樣品處理、DNA提取等多實(shí)驗(yàn)步驟,前處理和快速檢測試紙條步驟相似,全程免移液器操作,傻瓜式操作,易懂便捷,非專業(yè)人士也可進(jìn)行操作。
5、 配置標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范:基于專業(yè)實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ),新型轉(zhuǎn)基因快速檢測儀,采用專用的試劑盒(含快速提取試劑+PCR反應(yīng)試劑),專用PCR儀(16通道)。
6、 提供技術(shù)保障:基于實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),制定了我國第一個(gè)現(xiàn)場快速PCR的標(biāo)準(zhǔn),該技術(shù)設(shè)備,將為我國轉(zhuǎn)基因產(chǎn)業(yè)化政府監(jiān)管,育種企業(yè)品種保護(hù)提供技術(shù)支撐。
7、 應(yīng)用場景廣泛:一臺(tái)多用,除了適用于玉米、大豆中轉(zhuǎn)基因成分篩查及轉(zhuǎn)化體快速鑒定,還可作為日常科研實(shí)驗(yàn)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR使用,比常規(guī)PCR儀檢測速度更快,操作更簡單,節(jié)省一半以上科研時(shí)間。
六、適用場景
農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門及市場監(jiān)管部門對(duì)流通糧食、種子、飼料中轉(zhuǎn)基因成分的現(xiàn)場監(jiān)督抽查。
種子企業(yè)與育種單位開展品種真實(shí)性驗(yàn)證、親本及商品種子轉(zhuǎn)基因成分排查。
糧油加工企業(yè)原料入廠篩查與產(chǎn)品標(biāo)識(shí)符合性自查。
科研院所開展田間取樣后的快速初篩及分子標(biāo)記驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。
七、操作注意事項(xiàng)與維護(hù)
DNA提取及加樣過程應(yīng)分區(qū)操作,防止氣溶膠交叉污染導(dǎo)致假陽性,建議使用帶濾芯吸頭或一次性滴管并按規(guī)范更換。
內(nèi)參基因必須擴(kuò)增成功方可采信外源靶標(biāo)陰性結(jié)論;若內(nèi)參未出或Ct異常偏高,應(yīng)檢查提取質(zhì)量或重新制樣。
熒光檢測通道須定期用空白對(duì)照校驗(yàn)背景值,長期停用應(yīng)斷開電源并按說明書遮蓋防塵。
試劑盒及提取試劑嚴(yán)格按標(biāo)示溫度保存,反復(fù)凍融會(huì)降低酶活性與檢測靈敏度。
膠體金試紙僅作定性初篩,陽性或爭議樣本應(yīng)以PCR分子檢測結(jié)果為準(zhǔn)。
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