幾種蛋白質含量測量方法比較

更新時間：2010-08-31 點擊次數：4731

幾種蛋白質含量測量方法比較

蛋白質含量測定一直是生物化學中zui常用、zui基本的分析方法之一。蛋白質是生命的物質基礎，沒有蛋白質就沒有生命。機體每個系統都有蛋白質的參與，蛋白質占人體重量的16.3%。人體的蛋白質主要來源于食物：豆制品、肉類或者奶粉等副食品。既然蛋白質都來自于食物，那么測定食物中的蛋白質含量就變得很有必要。

蛋白質含量測定有好多種方法，歸納起來為：凱氏定氮法、雙縮尿法、Folin酚試劑法、紫外吸收法和考馬斯亮藍法。不同的方法，原理、步驟和實驗試劑都各不相同，但是一直以來，凱氏定氮法zui為經典，使用。近幾年，根據蛋白質測定的凱氏定氮法，很多廠家已研制出了相應的儀器，如：蛋白質測定儀。蛋白質測定儀測出的蛋白質含量，包括其他非蛋白含氮化合物，如游離氨基酸、尿素等物質，因此該儀器有時又被叫做粗蛋白測定儀。

下面我們列表來對各種蛋白質含量測定方法進行比較。

方法	靈敏度	時間	原理	干擾物質	說明
凱氏定氮法	靈敏度低，使用于0.2-1.0mg氮，誤差為±2%	費時，8-10小時，但如果采用凱氏定氮儀，縮短時間至4個小時	將蛋白氮轉化為氨氣，然后用酸吸收滴定	非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白質而分離）	用于標準蛋白質含量的準確測定，干擾少，如果采用凱氏定氮儀，就會大大縮短定氮時間
雙縮尿法	靈敏度低，1-20mg	中速20-30分鐘	多肽鍵+堿性Cu2+紫色絡合物	硫酸銨：Tris緩沖液，某些氨基酸	用于快速測定，但不靈敏，不同蛋白質顯色相似
Folin酚試劑法	靈敏度高，<5微克	慢速40-60分鐘	雙縮尿反應，磷鉬酸-磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原	硫酸銨，Tris緩沖液，甘氨酸，各種硫醇	耗費時間長；操作要嚴格計時；顏色深淺隨不同蛋白質變化
紫外吸收法	較為靈敏，50-100微克	快速5-10分鐘	蛋白質中的絡氨酸和色氨酸殘基在280nm處德光吸收	各種嘌呤和各種核苷酸	用于層析柱流出液的檢測，核酸的吸收可以校正
考馬斯亮藍法	靈敏度zui高，1-5微克	快速5-15分鐘	考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時，其λmax由465nm變為595nm	強堿性緩沖液，TritonX-100SDS	的方法，干擾物質少，顏色穩定，顏色深淺隨不同蛋白質變化

由上表可知，考馬斯亮藍法和Folin酚試劑法靈敏度zui高，比紫外吸收方法高10-20倍。凱氏定氮法雖然比較復雜，但是度較高，因此作物蛋白質測定的標準方法，而蛋白質測定儀的發明，更是推動了凱氏定氮法的發展。我們在選擇何種方法測定蛋白質含量時，應該根據實際情況，從下面幾個點考慮：1.實驗堆測定所要求的靈敏度和度。2.蛋白質的性質3.溶液中存在的干擾物4.測定時間。從以上四個方面綜合考慮，zui后選擇zui合適的測定方法。

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